Возраст не помеха
- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Последний раз редактировалось Мавика 11 дек 2018, 11:39, всего редактировалось 1 раз.
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
THE JOURNAL OF COMPARATIVE NEUROLOGY 246:170-180 (1986)
Quantitative Autoradiographic Analysis of Mu and Delta Opioid Binding Sites in the Rat Hippocampal Formation
BARBARAJ.CRAIN,KWEN-JENCHANG,AND JAMES0.McNAMARA Departments of Anatomy (B.J.C.), Anesthesiology (K.-J.C.),Medicine (Neurology) (J.O.M.),Pathology (B.J.C.),and Pharmacology (J.O.M.),Duke University Medical Center, Durham, North Carolina 27710; Epilepsy Research Unit (B.J.C.,J.O.M.), Veterans Administration Medical Center, Durham, and Department of Molecular Biology,WellcomeResearch Laboratories (K.-J.C.),Research Triangle Park, North Carolina 27705
ABSTRACT
The distributions of mu and delta opioid binding sites were studied in
rat hippocampal formation by using quantitative in vitro autoradiography. Mu binding sites, labeled with lZ5I-FK-33824,showed a highly organized laminar distribution. Binding was greatest at the foot of the obliterated hippocampal fissure in stratum lacunosum-moleculare of CA3. Stratum pyr- amidale and stratum lacunosum-moleculare of CA2 and stratum pyramidale of CA3 were next highest in mu binding, followed by stratum oriens and stratum radiatum of CA2, stratum oriens of CA3, and stratum pyramidale of CAI. The distribution of delta binding sites, labeled with 1251-D-ala2-D- leu5-enkephalinin the presence of the unlabeled mu receptor ligand PL-032, was similar to the distribution of mu binding in that binding within each region was greatest in a band centered over stratum pyramidale and in stratum lacunosum-moleculare. Over all, delta binding was greatest in CA2 followed by CA3 and then CA1. Compared to mu binding, delta binding was relatively enriched in stratum moleculare of the dentate gyrus. These lami- nar distributions correlate reasonably well with the distribution of enkeph- alin immuno-reactivity in hippocampal formation, although binding was
surprisingly low in stratum lucidum, an area rich in dynorphin and enkeph- alin immunoreactivity.
Key words: D-ala2-D-leu'-enkephalin,FK-33824, hippocampus, in vitro autoradiography,opioid binding sites
The hippocampal formation contains a variety of opioid peptides, including leu-enkephalin, met-enkephalin, and dynorphin, whose distributions have been defined immu- nohistochemically (Finley et al., '81; Gall et al., '81; Khach- aturian et al., '83;McGinty et al., '83; Sar et al., '78; Watson et al., '82). The importance of these endogenous opioid pep- tides in hippocampal function is indicated by the observa- tion that pyramidal and granule cell firing rates are increased when enkephalins are iontophoresed or super- fused onto hippocampal slices in vitro or injected into the hippocampusinuiuo(Dingledine,'81;Dunwiddieetal.,'80; Haas and Ryall, '80; Zieglgansberger et al., '79). However, a more complete understanding of the role of opioids in normal hippocampal function and in hippocampal re-
sponses to experimental manipulations requires detailed knowledge of opioid receptor distributions.
In uitro autoradiography is well suited for localizing opioid binding sites since it offers the advantages of good spatial resolution and reliable quantitation. We have there- foreexaminedthedistributionsofthemuanddeltasubpop- ulations of opioid receptors, which together account for approximately 80%of opioid binding sites in the hippocam- pal formation in the rat (Chang et al., '81).The distribution of mu binding sites in this structure has previously been describedqualitativelywithconflictingresults(Dukaetal.,
Accepted October 30, 1985.
0 1986 ALAN R. LISS, INC.
MU AND DELTA OPIOID BINDING SITES IN HIPPOCAMPUS 171
'81; Meibach and Maayani, '80; Goodman et al., '80; Unner-
stall et al., '83). The distribution of the delta binding sites
has been less extensively studied qualitatively (Duka et al.,
'81)and has not been studied in detail in rats under optimal
pharmacologic conditions. In the present study, we have
labeled mu sites with 1251-FK-33824a, highly specific mu
ligand (Chang et al., '79; Goodman et al., '80). Since a
correspondingly selective ligand is not readily available for
labeling delta sites, we have used 1251-D-ala2-D-leu5-en-membranes should be the same. This point has been dem-
kephalin (1251-DADL)in the presence of the highly selective mu receptor ligand Tyr-Pro-Phe-D-Pro-NH2(PL-032, a mor-
onstrated directly for 1251-FK-33824(Dingledine et a]., '83) and is likely to be true for the other ligands as well. Second, fixation should not alter the autoradiographic distributions of binding sites. This assumption has been validated for diprenorphine binding (Young and Kuhar, '79) and mu binding (Meibach and Maayani, '80; Moskowitz and Good- man, '84; Unnerstall et al., '83) and is also likely to be true for delta opioid binding. Under these circumstances the law of mass action is valid and can be used to calculate the fraction of the ligand bindin to each subpopulation (Good- man et al., '80). Thus, for 2%I-FK-33824 the percent occu- pancy (% Occ) is L/(L + Kd),where L is the concentration of ligand (0.7 nM in these experiments) and Kd is the dissocia- tion constant of 1251-FK-33824(1.2 nM for mu sites, 14 nM for delta binding sites, 165 nM for benzomorphan binding
sites, see Chang et al., '81). Therefore, approximately 37% of mu sites, 5% of delta sites, and 0.4% of benzomorphan binding sites are labeled at this concentration. Since the relative proportions of these three populations in the hip- pocampus are 4:1:1.2 (Changet al., '811, 96%of the 1251-FK- 33824 binding is to mu sites with approximately 3% and 0.4% binding to the delta and benzomorphan subpopula- tions, respectively. Similarly, the combination of 1251-DADL (0.5 nM) and PL-032 (1 pM) selectively labels deIta recep- tors. The dissociation constants of DADL for mu, delta, and benzomorphan receptors are 4 nM, 1.6 nM, and 500 nM, respectively (Chang et al., '81), while the corresponding constants for PL-032 are 2 nM, 20,000 nM, and 20,000 nM (unpublished observations). If used alone, the % Occ for DADL (0.5 nM) would be 11% of the mu receptors, 24% of the delta receptors, and <0.18 of the benzomorphan recep- tors. Corresponding percentages for 1 pM PL-032 would be
>99%,5%,and 5%.Occupancyby DADL in the presence of PL-032 can then be calculated by using the formula RL = RLo(l +K, x LY[1 +(K, x L) +(Kal x L')] where RL = % Occ, RLo = % Occ without PL-032, K, = affinity constant for DADL, L = its concentration, Kal = affinity constant of PL-032, and L1 = its concentration (Goodman et al., '80). In this case, 0.02%, 23%, and 0.1% of the mu, delta, and benzomorphan receptors would be occupied by DADL. Again, since the relative numbers of these three subpopu- lations in hippocampus are 4:1:1.2 (Chang et al., '811, 99%
of the DADL binding would be to delta receptors.
The selection of ligand concentrations involves a compro- mise between high concentrations, which label nearly all
the specificbinding sites but also have substantial levels of nonspecific binding, and very low concentrations, which label fewer specific binding sites but with proportionately less nonspecific binding. As illustrated above, the ligand concentrations used in the present experiments were well below their Kd values and thus nonspecific binding was minimized. "he corresponding disadvantage is that the ab- solute number of receptors occupied is relatively low, par- ticularly for the delta sites. However, with the use of iodinated ligands of high specific activity, and with the use
phiceptin analog) subpopulation.
(Chang et al.,
METHODS Animals
'83) to
label
this
Adult male Sprague-Dawley rats (weighing at least 200 g) were decapitated. The brains were quickly removed, fro- zen in isopentane chilled with methanol and dry ice, and stored at -60°C.
Autoradiography
In vitro autoradiography was performed by using the technique described by Young and Kuhar ('79). Ten-micron frozen coronal sections were cut, mounted onto gelatin- coated slides, and stored at -60°C until the day of incuba- tion. On the day of use, slides were moved to a -20°C freezer for several hours and then exposed to room temper- ature for 15 minutes. The slides received a brief light prefix- ation in 0.5% formaldehyde in 170 mM Tris-HC1buffer, pH 7.7, for 10 minutes. This was followed by two 30-second rinses in the same buffer. To promote removal of endoge- nous opioids, the sections were preincubated for 30 minutes in 50 mM Tris-HCI buffer, pH 7.7, containing 100 pM guan- osine diphosphate and 100 mM NaC1. After two rinses in buffer, the sections were incubated at 25°C for 60 minutes in 170 mM Tris-HC1buffer, pH 7.7, containing either 0.7 nM 1251-FK-33824(initially 2 mCi/nM) to label mu binding sites or 0.5 nM 1251-D-ala2D-leu5-enkephal(1i2n51-DADL, initially 2 mCi/nM) plus the selective mu receptor ligand PL-032 (1pM; Chang et al., '83) to label delta binding sites while quenching mu binding. Nonspecific binding in both cases was determined in the presence of 1 pM diprenor- phine. The preparation of Iz5I-FK-33824(Chang et al., '79) and lZ5I-DADL(Chang and Cuatrecasas, '79) has been de- scribed previously.
After incubation, the sections were rinsed four times in buffer at 0°C for 9 minutes total and dipped briefly in water. Sections for autoradiography were dried under a stream of cool, filtered air and stored with desiccant under a vacuum. The dried sections were apposed to either emul- sion-coated coverslips (Kodak NTB-2)or LKB Ultrofilm 3H. Exposure times for the coverslip preparations were 6-8 weeks. Exposure times for the Ultrofilm preparations were 10 days to 3 weeks for 1251-FK-33824-labeledsections and 3-8 weeks for 1251-DADL-labeledsections.
Selected sections were wiped onto GF-BWhatman filters, placed in Triton-toluene, and counted a t 75% efficiency in an Intertechnique liquid scintillation counter in order to check the amount of binding under total binding and non- specific binding conditions. With this measurement, spe- cific (total minus nonspecific) binding for whole coronal sections was 90-97% for 12%FK-33824and 65-82% for lZ5I- DADL.
Binding parameters of 12%FK-33824 (Goodman et al., '801, 1251-DADL,PL-032, and diprenorphine to fixed, slide- mounted sections (Crain et al., '85; Young and Kuhar, '79) have previously been shown to be comparable to binding parameters in unfixed rat brain membranes. To apply these two sets of binding parameters to autoradiographs of the hippocampus, two assumptions must be valid. First, bind- ing to whole brain membranes and binding to hippocampal
172
B.J. CRAIN, K.-6. CHANG, AND J.O. McNAMARA TABLE 1.Quantitative Distributions of Mu and Delta Opioid Binding Sites in Hippocampal Formation'
CA1
Stratum lacunosum-moleculare Stratum radiatum
Stratum pyramidale
Stratum oriens
CA2
Stratum lacunosum-moleculare Stratum radiatum
Stratum pyramidale
Stratum oriens
CA3
Stratum lacunosum-moleculare Stralum radiatum
Stratum lucidum
Stratum pyramidale
Stratum oriens
Dentate gyrus Stratum moleculare
Suprapyramidal blade
Infrapyramidal blade
Stratum yanulosum Hilus-adjacent to st. granulosum
-central portion Nonspecific binding
'2511-FK-338242 (fmol boundimg protein)
mean k SEM 12.1 f 0.3
8.5i-0.3 19.4 k 0.3 10.6 k 0.3
32.4 k 1.1 19.2 k 0.5 34.9i1.0 21.1 f 0.3
44.3 f 1.4 15.6k0.3 12.1 10.2 31.5f0.9 21.4 f 0.5
13.3 1 0.Mouter) 11.5 IO.Mmiddle) 14.2 2 0.2(inner)
11.1I 0.5 10.2 + 0.3 13.0 i 0.5 11.8 i 0.4
1.5 f 0.1
Iz5I-DADLplus PL-032" (fmol boundimg protein) mean k SEM
3.0 i 0.2 2.7 10.2 4.3k0.3 3.3 k 0.5
5.9 10.2 4.8 1 0.1 6.2 f 0.2 5.2 k 0.2
5.3 10.3 3.2 I 0.1 3.2 k 0.1 4.3 10.3 4.1 10.5
4.7 I 0.3 3.8k0.1
'Mean velues obtained from four sections from one animal (n = 4).
'Binding to mu sites = 96%;proportion of mu sites labeled = 474.
'Binding to delta sites = 99%; proportion of delta sltes labeled = 23%.'""-I-DADL, i2s11-D-ala'-D~len'-enkephallPnL. ~O32T, yr-Pro- Phe-Pro-NH2.
of relatively long exposure times, satisfactory autoradio- graphic images could still be obtained. Even in areas with relatively low binding (e.g., stratum lucidum and parts of the dentate gyrus) total binding was at least five to six times greater than nonspecific binding (Table 1).
Preparation of standards
Due to the' time involved in preparing 1251-standardst,he amount of 'L51-labeledenkephalin required, and the rela- tively short half-life of the isotope, it was impractical to prepare fresh 1251-standardsfor every experiment. How- ever, within a given optical density range, there is a con- stant relationship between the amount of lZ5I and the amount of 3H needed to produce the same optical density. By quantifying this relationship under rigidly controlled exposure and developing conditions, the amount of 1251 present in a given region of a brain section can later be accurately determined from a set of 3H-labeledstandards. Similar relationships have previously been described be- tween the densities produced by commercially available 14C plastic standards and 3H-labeledbrain paste standards (Pan et al., '83; Penney et al., '81) and 14Cplastic standards and
''C-labeled brain tissue (Reivichet al., '69).
First, two series of brain paste standards were prepared
tein assays (Lowry et al., '51) and for solubilization in Protosol and counting in a liquid scintillation counter.Thus, the value for cpmfmg protein was determined directly for each standard.
Next, after preparation of the standards, experiments
were performed to determine the relationship between the
o tical densities produced as a function of time by these 4)51-and 3H-standards.First, multiple sets of lZ5I-and 'H-
standards were exposed to the same sheets of film for var- ious times ranging from 2 to 56 days. The optical density produced on the film by each standard section was deter- mined by using a Leitz microscope linked t o a Zeiss optical densitometer and a Rockwell computer. Microscopic fields 100 pm in diameter were analyzed. (Due to the size of the silver grains, measurements of smaller fields were highly variable.) For each section, five to nine separate readings were averaged, with standard errors of the mean less than 5% of the mean for each section. Six to ten sections were analyzed at each concentration in each experiment. The optical density values obtained in this manner were plotted as a function of the logarithm of the cpmfmg protein as shown in Figure 1. With various exposure times, different concentrations of 1251 and 3H produce linear plots. Thus, for a given exposure time and over an appropriate optical den- sity range,
O D I = a 1 . l o g ( ~ p m ' ~ ~ I / p mr o g t e i n ) + b I ODH = aH .log (cpm 3H/mgprotein) +bH
where ODI and ODH are the optical densities produced by the Iz5Iand 3H sources, a1 and aH are the slopes of the two lines,bIandbHaretheY-interceptsofthelines,andcpm
by using a di-iodinatedenkephalin fraction (lZ5I-standards) and 'H-ornithine (3H-standards;Unnerstall et al., '82). Ten lZ5I-standardsi,nitiallycontaining0-1.7 x lo6cpdmgpro- tein, were sectioned at 10 pm, and nine 3H-standards, 0-3
and
x lo6cpmfmg protein, were sectioned at 16 pm. Uniform section thickness was particularly important for the lZ5I- standards since the entire section contributes to the auto- radiographicsignal.Additionalsectionsweretakenforpro-
i
2.9 f 0.2
4.0
0.5 k 0.0
0.2 2.7 i 0.2
Quantitative Autoradiographic Analysis of Mu and Delta Opioid Binding Sites in the Rat Hippocampal Formation
BARBARAJ.CRAIN,KWEN-JENCHANG,AND JAMES0.McNAMARA Departments of Anatomy (B.J.C.), Anesthesiology (K.-J.C.),Medicine (Neurology) (J.O.M.),Pathology (B.J.C.),and Pharmacology (J.O.M.),Duke University Medical Center, Durham, North Carolina 27710; Epilepsy Research Unit (B.J.C.,J.O.M.), Veterans Administration Medical Center, Durham, and Department of Molecular Biology,WellcomeResearch Laboratories (K.-J.C.),Research Triangle Park, North Carolina 27705
ABSTRACT
The distributions of mu and delta opioid binding sites were studied in
rat hippocampal formation by using quantitative in vitro autoradiography. Mu binding sites, labeled with lZ5I-FK-33824,showed a highly organized laminar distribution. Binding was greatest at the foot of the obliterated hippocampal fissure in stratum lacunosum-moleculare of CA3. Stratum pyr- amidale and stratum lacunosum-moleculare of CA2 and stratum pyramidale of CA3 were next highest in mu binding, followed by stratum oriens and stratum radiatum of CA2, stratum oriens of CA3, and stratum pyramidale of CAI. The distribution of delta binding sites, labeled with 1251-D-ala2-D- leu5-enkephalinin the presence of the unlabeled mu receptor ligand PL-032, was similar to the distribution of mu binding in that binding within each region was greatest in a band centered over stratum pyramidale and in stratum lacunosum-moleculare. Over all, delta binding was greatest in CA2 followed by CA3 and then CA1. Compared to mu binding, delta binding was relatively enriched in stratum moleculare of the dentate gyrus. These lami- nar distributions correlate reasonably well with the distribution of enkeph- alin immuno-reactivity in hippocampal formation, although binding was
surprisingly low in stratum lucidum, an area rich in dynorphin and enkeph- alin immunoreactivity.
Key words: D-ala2-D-leu'-enkephalin,FK-33824, hippocampus, in vitro autoradiography,opioid binding sites
The hippocampal formation contains a variety of opioid peptides, including leu-enkephalin, met-enkephalin, and dynorphin, whose distributions have been defined immu- nohistochemically (Finley et al., '81; Gall et al., '81; Khach- aturian et al., '83;McGinty et al., '83; Sar et al., '78; Watson et al., '82). The importance of these endogenous opioid pep- tides in hippocampal function is indicated by the observa- tion that pyramidal and granule cell firing rates are increased when enkephalins are iontophoresed or super- fused onto hippocampal slices in vitro or injected into the hippocampusinuiuo(Dingledine,'81;Dunwiddieetal.,'80; Haas and Ryall, '80; Zieglgansberger et al., '79). However, a more complete understanding of the role of opioids in normal hippocampal function and in hippocampal re-
sponses to experimental manipulations requires detailed knowledge of opioid receptor distributions.
In uitro autoradiography is well suited for localizing opioid binding sites since it offers the advantages of good spatial resolution and reliable quantitation. We have there- foreexaminedthedistributionsofthemuanddeltasubpop- ulations of opioid receptors, which together account for approximately 80%of opioid binding sites in the hippocam- pal formation in the rat (Chang et al., '81).The distribution of mu binding sites in this structure has previously been describedqualitativelywithconflictingresults(Dukaetal.,
Accepted October 30, 1985.
0 1986 ALAN R. LISS, INC.
MU AND DELTA OPIOID BINDING SITES IN HIPPOCAMPUS 171
'81; Meibach and Maayani, '80; Goodman et al., '80; Unner-
stall et al., '83). The distribution of the delta binding sites
has been less extensively studied qualitatively (Duka et al.,
'81)and has not been studied in detail in rats under optimal
pharmacologic conditions. In the present study, we have
labeled mu sites with 1251-FK-33824a, highly specific mu
ligand (Chang et al., '79; Goodman et al., '80). Since a
correspondingly selective ligand is not readily available for
labeling delta sites, we have used 1251-D-ala2-D-leu5-en-membranes should be the same. This point has been dem-
kephalin (1251-DADL)in the presence of the highly selective mu receptor ligand Tyr-Pro-Phe-D-Pro-NH2(PL-032, a mor-
onstrated directly for 1251-FK-33824(Dingledine et a]., '83) and is likely to be true for the other ligands as well. Second, fixation should not alter the autoradiographic distributions of binding sites. This assumption has been validated for diprenorphine binding (Young and Kuhar, '79) and mu binding (Meibach and Maayani, '80; Moskowitz and Good- man, '84; Unnerstall et al., '83) and is also likely to be true for delta opioid binding. Under these circumstances the law of mass action is valid and can be used to calculate the fraction of the ligand bindin to each subpopulation (Good- man et al., '80). Thus, for 2%I-FK-33824 the percent occu- pancy (% Occ) is L/(L + Kd),where L is the concentration of ligand (0.7 nM in these experiments) and Kd is the dissocia- tion constant of 1251-FK-33824(1.2 nM for mu sites, 14 nM for delta binding sites, 165 nM for benzomorphan binding
sites, see Chang et al., '81). Therefore, approximately 37% of mu sites, 5% of delta sites, and 0.4% of benzomorphan binding sites are labeled at this concentration. Since the relative proportions of these three populations in the hip- pocampus are 4:1:1.2 (Changet al., '811, 96%of the 1251-FK- 33824 binding is to mu sites with approximately 3% and 0.4% binding to the delta and benzomorphan subpopula- tions, respectively. Similarly, the combination of 1251-DADL (0.5 nM) and PL-032 (1 pM) selectively labels deIta recep- tors. The dissociation constants of DADL for mu, delta, and benzomorphan receptors are 4 nM, 1.6 nM, and 500 nM, respectively (Chang et al., '81), while the corresponding constants for PL-032 are 2 nM, 20,000 nM, and 20,000 nM (unpublished observations). If used alone, the % Occ for DADL (0.5 nM) would be 11% of the mu receptors, 24% of the delta receptors, and <0.18 of the benzomorphan recep- tors. Corresponding percentages for 1 pM PL-032 would be
>99%,5%,and 5%.Occupancyby DADL in the presence of PL-032 can then be calculated by using the formula RL = RLo(l +K, x LY[1 +(K, x L) +(Kal x L')] where RL = % Occ, RLo = % Occ without PL-032, K, = affinity constant for DADL, L = its concentration, Kal = affinity constant of PL-032, and L1 = its concentration (Goodman et al., '80). In this case, 0.02%, 23%, and 0.1% of the mu, delta, and benzomorphan receptors would be occupied by DADL. Again, since the relative numbers of these three subpopu- lations in hippocampus are 4:1:1.2 (Chang et al., '811, 99%
of the DADL binding would be to delta receptors.
The selection of ligand concentrations involves a compro- mise between high concentrations, which label nearly all
the specificbinding sites but also have substantial levels of nonspecific binding, and very low concentrations, which label fewer specific binding sites but with proportionately less nonspecific binding. As illustrated above, the ligand concentrations used in the present experiments were well below their Kd values and thus nonspecific binding was minimized. "he corresponding disadvantage is that the ab- solute number of receptors occupied is relatively low, par- ticularly for the delta sites. However, with the use of iodinated ligands of high specific activity, and with the use
phiceptin analog) subpopulation.
(Chang et al.,
METHODS Animals
'83) to
label
this
Adult male Sprague-Dawley rats (weighing at least 200 g) were decapitated. The brains were quickly removed, fro- zen in isopentane chilled with methanol and dry ice, and stored at -60°C.
Autoradiography
In vitro autoradiography was performed by using the technique described by Young and Kuhar ('79). Ten-micron frozen coronal sections were cut, mounted onto gelatin- coated slides, and stored at -60°C until the day of incuba- tion. On the day of use, slides were moved to a -20°C freezer for several hours and then exposed to room temper- ature for 15 minutes. The slides received a brief light prefix- ation in 0.5% formaldehyde in 170 mM Tris-HC1buffer, pH 7.7, for 10 minutes. This was followed by two 30-second rinses in the same buffer. To promote removal of endoge- nous opioids, the sections were preincubated for 30 minutes in 50 mM Tris-HCI buffer, pH 7.7, containing 100 pM guan- osine diphosphate and 100 mM NaC1. After two rinses in buffer, the sections were incubated at 25°C for 60 minutes in 170 mM Tris-HC1buffer, pH 7.7, containing either 0.7 nM 1251-FK-33824(initially 2 mCi/nM) to label mu binding sites or 0.5 nM 1251-D-ala2D-leu5-enkephal(1i2n51-DADL, initially 2 mCi/nM) plus the selective mu receptor ligand PL-032 (1pM; Chang et al., '83) to label delta binding sites while quenching mu binding. Nonspecific binding in both cases was determined in the presence of 1 pM diprenor- phine. The preparation of Iz5I-FK-33824(Chang et al., '79) and lZ5I-DADL(Chang and Cuatrecasas, '79) has been de- scribed previously.
After incubation, the sections were rinsed four times in buffer at 0°C for 9 minutes total and dipped briefly in water. Sections for autoradiography were dried under a stream of cool, filtered air and stored with desiccant under a vacuum. The dried sections were apposed to either emul- sion-coated coverslips (Kodak NTB-2)or LKB Ultrofilm 3H. Exposure times for the coverslip preparations were 6-8 weeks. Exposure times for the Ultrofilm preparations were 10 days to 3 weeks for 1251-FK-33824-labeledsections and 3-8 weeks for 1251-DADL-labeledsections.
Selected sections were wiped onto GF-BWhatman filters, placed in Triton-toluene, and counted a t 75% efficiency in an Intertechnique liquid scintillation counter in order to check the amount of binding under total binding and non- specific binding conditions. With this measurement, spe- cific (total minus nonspecific) binding for whole coronal sections was 90-97% for 12%FK-33824and 65-82% for lZ5I- DADL.
Binding parameters of 12%FK-33824 (Goodman et al., '801, 1251-DADL,PL-032, and diprenorphine to fixed, slide- mounted sections (Crain et al., '85; Young and Kuhar, '79) have previously been shown to be comparable to binding parameters in unfixed rat brain membranes. To apply these two sets of binding parameters to autoradiographs of the hippocampus, two assumptions must be valid. First, bind- ing to whole brain membranes and binding to hippocampal
172
B.J. CRAIN, K.-6. CHANG, AND J.O. McNAMARA TABLE 1.Quantitative Distributions of Mu and Delta Opioid Binding Sites in Hippocampal Formation'
CA1
Stratum lacunosum-moleculare Stratum radiatum
Stratum pyramidale
Stratum oriens
CA2
Stratum lacunosum-moleculare Stratum radiatum
Stratum pyramidale
Stratum oriens
CA3
Stratum lacunosum-moleculare Stralum radiatum
Stratum lucidum
Stratum pyramidale
Stratum oriens
Dentate gyrus Stratum moleculare
Suprapyramidal blade
Infrapyramidal blade
Stratum yanulosum Hilus-adjacent to st. granulosum
-central portion Nonspecific binding
'2511-FK-338242 (fmol boundimg protein)
mean k SEM 12.1 f 0.3
8.5i-0.3 19.4 k 0.3 10.6 k 0.3
32.4 k 1.1 19.2 k 0.5 34.9i1.0 21.1 f 0.3
44.3 f 1.4 15.6k0.3 12.1 10.2 31.5f0.9 21.4 f 0.5
13.3 1 0.Mouter) 11.5 IO.Mmiddle) 14.2 2 0.2(inner)
11.1I 0.5 10.2 + 0.3 13.0 i 0.5 11.8 i 0.4
1.5 f 0.1
Iz5I-DADLplus PL-032" (fmol boundimg protein) mean k SEM
3.0 i 0.2 2.7 10.2 4.3k0.3 3.3 k 0.5
5.9 10.2 4.8 1 0.1 6.2 f 0.2 5.2 k 0.2
5.3 10.3 3.2 I 0.1 3.2 k 0.1 4.3 10.3 4.1 10.5
4.7 I 0.3 3.8k0.1
'Mean velues obtained from four sections from one animal (n = 4).
'Binding to mu sites = 96%;proportion of mu sites labeled = 474.
'Binding to delta sites = 99%; proportion of delta sltes labeled = 23%.'""-I-DADL, i2s11-D-ala'-D~len'-enkephallPnL. ~O32T, yr-Pro- Phe-Pro-NH2.
of relatively long exposure times, satisfactory autoradio- graphic images could still be obtained. Even in areas with relatively low binding (e.g., stratum lucidum and parts of the dentate gyrus) total binding was at least five to six times greater than nonspecific binding (Table 1).
Preparation of standards
Due to the' time involved in preparing 1251-standardst,he amount of 'L51-labeledenkephalin required, and the rela- tively short half-life of the isotope, it was impractical to prepare fresh 1251-standardsfor every experiment. How- ever, within a given optical density range, there is a con- stant relationship between the amount of lZ5I and the amount of 3H needed to produce the same optical density. By quantifying this relationship under rigidly controlled exposure and developing conditions, the amount of 1251 present in a given region of a brain section can later be accurately determined from a set of 3H-labeledstandards. Similar relationships have previously been described be- tween the densities produced by commercially available 14C plastic standards and 3H-labeledbrain paste standards (Pan et al., '83; Penney et al., '81) and 14Cplastic standards and
''C-labeled brain tissue (Reivichet al., '69).
First, two series of brain paste standards were prepared
tein assays (Lowry et al., '51) and for solubilization in Protosol and counting in a liquid scintillation counter.Thus, the value for cpmfmg protein was determined directly for each standard.
Next, after preparation of the standards, experiments
were performed to determine the relationship between the
o tical densities produced as a function of time by these 4)51-and 3H-standards.First, multiple sets of lZ5I-and 'H-
standards were exposed to the same sheets of film for var- ious times ranging from 2 to 56 days. The optical density produced on the film by each standard section was deter- mined by using a Leitz microscope linked t o a Zeiss optical densitometer and a Rockwell computer. Microscopic fields 100 pm in diameter were analyzed. (Due to the size of the silver grains, measurements of smaller fields were highly variable.) For each section, five to nine separate readings were averaged, with standard errors of the mean less than 5% of the mean for each section. Six to ten sections were analyzed at each concentration in each experiment. The optical density values obtained in this manner were plotted as a function of the logarithm of the cpmfmg protein as shown in Figure 1. With various exposure times, different concentrations of 1251 and 3H produce linear plots. Thus, for a given exposure time and over an appropriate optical den- sity range,
O D I = a 1 . l o g ( ~ p m ' ~ ~ I / p mr o g t e i n ) + b I ODH = aH .log (cpm 3H/mgprotein) +bH
where ODI and ODH are the optical densities produced by the Iz5Iand 3H sources, a1 and aH are the slopes of the two lines,bIandbHaretheY-interceptsofthelines,andcpm
by using a di-iodinatedenkephalin fraction (lZ5I-standards) and 'H-ornithine (3H-standards;Unnerstall et al., '82). Ten lZ5I-standardsi,nitiallycontaining0-1.7 x lo6cpdmgpro- tein, were sectioned at 10 pm, and nine 3H-standards, 0-3
and
x lo6cpmfmg protein, were sectioned at 16 pm. Uniform section thickness was particularly important for the lZ5I- standards since the entire section contributes to the auto- radiographicsignal.Additionalsectionsweretakenforpro-
i
2.9 f 0.2
4.0
0.5 k 0.0
0.2 2.7 i 0.2
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Это треть статьи
Что то мне не кажется она читаемой в таком виде
Из за пдф цепляется и инфа из графиков
Посмотри если интересно, то я лучше найду вариант расшарить через интернет депозитарий
Что то мне не кажется она читаемой в таком виде
Из за пдф цепляется и инфа из графиков
Посмотри если интересно, то я лучше найду вариант расшарить через интернет депозитарий
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Он был прав. Нет смысла после 43 пытаться
Нам же ехать, а не шашечки
И это как казино, в котором только само казино всегда в выигрыше.
Но есть и очень удачливые люди, и наверное, где то есть те, у кого получается в 43 со своими як, и может даже в 43,5
Последний раз редактировалось Malina X 20 сен 2018, 00:46, всего редактировалось 1 раз.
- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Последний раз редактировалось Мавика 11 дек 2018, 11:39, всего редактировалось 1 раз.
- Miracles
- Спелая ягодка
- Сообщения: 4036
- Зарегистрирован: 03 июн 2018, 19:38
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 5
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД Кунцево (КДП).
4 прота со стимой, 1 ЕЦ, 1 ЕЦ срыв - ранняя овуля, 1 перенос - пролет. - Где было удачное ЭКО: Со дня на день будет
- Благодарил (а): 1787 раз
- Поблагодарили: 1756 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Ну не знаю.... без детей не хочу.
Тогда уж ДЯ!
Мавика, статистика менее 30% эмбрионов без поломок - если это нормально, то как вообще воспроизводится человечество в естественном цикле???
А ресурс интересный, конечно, там есть очень познавательные эксперименты и исследования.
Оказывается, бывают люди даже 44,ХХ и воспроизводяться же ж!
Тогда уж ДЯ!
Мавика, статистика менее 30% эмбрионов без поломок - если это нормально, то как вообще воспроизводится человечество в естественном цикле???
А ресурс интересный, конечно, там есть очень познавательные эксперименты и исследования.
Оказывается, бывают люди даже 44,ХХ и воспроизводяться же ж!
- А чудеса случаются?
- Случаются. Но только с теми, кто в них верит.
- А с теми, кто не верит?
- А с теми, кто не верит, случаются события, не подлежащие рациональному объяснению.
Чудесный беременный домик(35-40+)
Апчхиии на тебя персонально (Зайчвадзе)
Апчхииии на тебя официально декретное!!! (Счастливый Светик)
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Вот вот - тогда уж дяMiracles писал(а): ↑20 сен 2018, 00:02Ну не знаю.... без детей не хочу.
Тогда уж ДЯ!
Мавика, статистика менее 30% эмбрионов без поломок - если это нормально, то как вообще воспроизводится человечество в естественном цикле???
А ресурс интересный, конечно, там есть очень познавательные эксперименты и исследования.
Оказывается, бывают люди даже 44,ХХ и воспроизводяться же ж!
Дальше чем дя, я вот лично не готова ( донорский эмбрион)
Про эмбрионы - эмбриологи говорят, что 50% бластоциста после ПГД это норма для здоровых молодых женщин.
Не 30%
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Для меня без детей невозможно! То есть вообще невозможноМавика писал(а): ↑19 сен 2018, 23:48Малина, я вас понимаю! Это ваше решение с мужем.
Будем надеяться, что у вас все получится.
Нам же, тем у кого вообще ноль детишек, очень сложно все дается.
Чтобы решиться прекратить лечение, нужно просто растерзать себя на кусочки...
С другой стороны, живут же люди без детишек и ниче...
и даже веселые фотки из путешествий публикуют....
У меня много и таких знакомых.
Вот не все понимают, зачем так убиваться, чтобы был второй ребёнок - многим и одного достаточно, но для меня это действительно много лет была самая большая мечта. ( Первый у меня очень хороший, и очень любимый, то есть смысл не в том, чтобы работу над ошибками сделать)
поэтому я вас ооооочень хорошо понимаю!
И понимаю, что намного сложнее даётся принятие дя если нет своих детей, и см
- Издалека я
- Заводная старушенция
- Сообщения: 5094
- Зарегистрирован: 27 июл 2016, 07:23
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 1
- Стаж бесплодия: 9 лет
- В каких клиниках проводилось лечение: ИРМ
- Сколько у вас детей: 1
- Откуда: Казахстан
- Благодарил (а): 1263 раза
- Поблагодарили: 1466 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Ну как воспроизводится человечество... Молча.
Лишь треть ЕБ обречена на успех. Не попыток, то есть попаданий в овулю, а именно случаев, где пошло оплодотворение. Я тоже где-то читала,в каком то меджурнале про ВРТ и вообще про Б. И оплодотворенная Я может заблудиться (ВБ), и задержка в 1 день с последующими М - запросто бхб или ЗБ, да и деление клеток тоже просто может прекратиться. Обычные женщины этого не замечают. Если организм здоровый, без вмешательств, без доп.гормрнов, то все само по себе в большинстве случаев выходит. И никто ничего не заметил.
Так что те-же 30%! В среднем.
И ещё я видела фото Я. Как она из фолика выходит. Реально, похожа на красную икринку))). Вроде как 0,2 мм диаметр. На белом листе её видно даже глазом будет)))
Лишь треть ЕБ обречена на успех. Не попыток, то есть попаданий в овулю, а именно случаев, где пошло оплодотворение. Я тоже где-то читала,в каком то меджурнале про ВРТ и вообще про Б. И оплодотворенная Я может заблудиться (ВБ), и задержка в 1 день с последующими М - запросто бхб или ЗБ, да и деление клеток тоже просто может прекратиться. Обычные женщины этого не замечают. Если организм здоровый, без вмешательств, без доп.гормрнов, то все само по себе в большинстве случаев выходит. И никто ничего не заметил.
Так что те-же 30%! В среднем.
И ещё я видела фото Я. Как она из фолика выходит. Реально, похожа на красную икринку))). Вроде как 0,2 мм диаметр. На белом листе её видно даже глазом будет)))
2017 - ЕБ, 27 июня 2018 - ЭКС -
СЫНОЧЕК
СЫНОЧЕК
- Konfetova
- Спелая ягодка
- Сообщения: 3145
- Зарегистрирован: 17 апр 2013, 08:54
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 2852 раза
- Поблагодарили: 2062 раза
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Девочки, мое мнение, что вот реально с пробирки без детей не уходят и у нас у всех будут желанные детки
Но! Возможно, у кого-то с ДЯ, у кого-то с СМ или ДЭ, а у кого-то может приемный
И если сейчас эта мысль внушает ужас и «нет, этому не бывать», значит ещё не время, а то к тому времени когда других вариантов не останется наше сознание примет все это безболезненно и может быть даже с радостью)
Сознание очень умная штука)) умеет подстраиваться под обстоятельства)
Ну это конечно в случаях когда действительно хочешь детей любой ценой
Вот такое мое имхо, которого никто не спрашивал))))
Но! Возможно, у кого-то с ДЯ, у кого-то с СМ или ДЭ, а у кого-то может приемный
И если сейчас эта мысль внушает ужас и «нет, этому не бывать», значит ещё не время, а то к тому времени когда других вариантов не останется наше сознание примет все это безболезненно и может быть даже с радостью)
Сознание очень умная штука)) умеет подстраиваться под обстоятельства)
Ну это конечно в случаях когда действительно хочешь детей любой ценой
Вот такое мое имхо, которого никто не спрашивал))))
Буду самой счастливой многодетной мамой!)


- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Конфетова, у тебя очень правильное мнение!
Считаю, оно намного ценнее чем поход к психологу.
ВСе кратко и по делу!!
Считаю, оно намного ценнее чем поход к психологу.
ВСе кратко и по делу!!
- ritty77
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 135
- Зарегистрирован: 21 фев 2018, 17:13
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: МЦРМ, NGC
- Где было удачное ЭКО: в процессе
- Благодарил (а): 104 раза
- Поблагодарили: 17 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Конфетова, согласна с Вами! Если хочешь детей любой ценой - все средства хороши! Как говорится - победителей не судят! Я искренне восхищаюсь женщинами, которые принимают все варианты развития событий! В принципе, семьями такими восхищаюсь! Видимо я в свои 40 еще не созрела..... Скорее всего это моя слабость и трусость говорит во мне!
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
В 40 и рано так думатьritty77 писал(а): ↑20 сен 2018, 12:06Конфетова, согласна с Вами! Если хочешь детей любой ценой - все средства хороши! Как говорится - победителей не судят! Я искренне восхищаюсь женщинами, которые принимают все варианты развития событий! В принципе, семьями такими восхищаюсь! Видимо я в свои 40 еще не созрела..... Скорее всего это моя слабость и трусость говорит во мне!
Время ещё есть и возраст позволяет со своими пробовать
-
Malina X
- Веселая дошкольница
- Сообщения: 173
- Зарегистрирован: 08 сен 2018, 10:41
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Стаж бесплодия: Вторичное
- Где было удачное ЭКО: ждем
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 34 раза
- Поблагодарили: 29 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Все именно так:)Konfetova писал(а): ↑20 сен 2018, 08:49Девочки, мое мнение, что вот реально с пробирки без детей не уходят и у нас у всех будут желанные детки
Но! Возможно, у кого-то с ДЯ, у кого-то с СМ или ДЭ, а у кого-то может приемный
И если сейчас эта мысль внушает ужас и «нет, этому не бывать», значит ещё не время, а то к тому времени когда других вариантов не останется наше сознание примет все это безболезненно и может быть даже с радостью)
Сознание очень умная штука)) умеет подстраиваться под обстоятельства)
Ну это конечно в случаях когда действительно хочешь детей любой ценой
Вот такое мое имхо, которого никто не спрашивал))))
Хотелось бы только поменьше потерь на этом пути, в том числе финансовых)
-
жуляжуль06
- Пока в пеленках
- Сообщения: 52
- Зарегистрирован: 20 фев 2017, 21:20
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Стаж бесплодия: 11
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД, Витра
- Где было удачное ЭКО: МиД
- Сколько у вас детей: 2
- Благодарил (а): 1 раз
- Поблагодарили: 14 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Конфетова, подскажите, пожалуйста, где у вас с низким амг получилось?
- Зайчвадзе
- Спелая ягодка
- Сообщения: 3649
- Зарегистрирован: 03 май 2016, 23:48
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 9
- Стаж бесплодия: 13
- В каких клиниках проводилось лечение: МЦРМ, МиД, NGC
- Где было удачное ЭКО: NGC
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 1809 раз
- Поблагодарили: 2569 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Конфетова, дай обниму!!!!
Я знаю, что у меня будут дети. И я готова к сценарию приемного родительства. У меня для этого всё готово. В моей квартире есть комната детская и она пока пустая. В ней очень светло))) Я в ней занимаюсь йогой, йожусь так сказать)))) куплены маленькие квартиры студии, пока мы их сдаем, но жильем дети уже обеспечены)))) У нас построен за городом дом и там тоже всё готово. Осталось пройти путь ЭКО до конца и в случае не успеха, свернуть в сторону опеки)))) Я знаю, что у меня будут дети.
Я знаю, что у меня будут дети. И я готова к сценарию приемного родительства. У меня для этого всё готово. В моей квартире есть комната детская и она пока пустая. В ней очень светло))) Я в ней занимаюсь йогой, йожусь так сказать)))) куплены маленькие квартиры студии, пока мы их сдаем, но жильем дети уже обеспечены)))) У нас построен за городом дом и там тоже всё готово. Осталось пройти путь ЭКО до конца и в случае не успеха, свернуть в сторону опеки)))) Я знаю, что у меня будут дети.
КАЖДОЙ ЗАЙЧИХЕ ПО ЗАЙЧОНКУ!!! 
11дпп ХГЧ = 254
13дпп ХГЧ = 1037
СБ +
03.06.2019 Митривна вес 3570, рост 53 см.
- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Последний раз редактировалось Мавика 30 окт 2018, 16:14, всего редактировалось 1 раз.
- Tati76
- Задорная первоклашка
- Сообщения: 238
- Зарегистрирован: 31 май 2018, 09:33
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 1
- Стаж бесплодия: 2
- В каких клиниках проводилось лечение: Франция
- Где было удачное ЭКО: Пока нет результата
- Сколько у вас детей: 2
- Благодарил (а): 1 раз
- Поблагодарили: 91 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Зайч у вас обязательно будут дети!!! Если очень хотеть и идти к цели, то все получится...не получится только у тех, кто устанет идти и не готов к любому варианту (это видно мой случайЗайчвадзе писал(а): ↑20 сен 2018, 13:02Конфетова, дай обниму!!!!
Я знаю, что у меня будут дети. И я готова к сценарию приемного родительства. У меня для этого всё готово. В моей квартире есть комната детская и она пока пустая. В ней очень светло))) Я в ней занимаюсь йогой, йожусь так сказать)))) куплены маленькие квартиры студии, пока мы их сдаем, но жильем дети уже обеспечены)))) У нас построен за городом дом и там тоже всё готово. Осталось пройти путь ЭКО до конца и в случае не успеха, свернуть в сторону опеки)))) Я знаю, что у меня будут дети.
- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
АНалогично ТАти76 я с мужем к любому варианту точно не готовы...
- Konfetova
- Спелая ягодка
- Сообщения: 3145
- Зарегистрирован: 17 апр 2013, 08:54
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 2852 раза
- Поблагодарили: 2062 раза
Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Я вот сначала не готова была к ЭКО - как так, какая ещё стимуляция, какое ещё оплодотворение в пробирке, это все неестественно, это против природы, против бога и тд
Нет, нет, нет, или сами или никак (была в подсознании надежда на еб видимо)) думала до последнего буду биться за еб)
А когда поняла, что или эко или без детей, то потихоньку, полегоньку, помолясь, читая пробирку - а и вроде ничего в этом эко страшного и нет, и даже церковь одобряет, и вообще все равно это только бог решает, а врачи лишь проводники его воли и тд) и как-то вот совсем по другому уже на эко смотрю, чем в начале планирования)) и даже не понимаю те пары, которые все планируют и планируют еб десятилетиями))
Сейчас тот же путь прохожу с дя)) сначала была стадия отрицания)) сейчас уже принятие пошло))
Нет, нет, нет, или сами или никак (была в подсознании надежда на еб видимо)) думала до последнего буду биться за еб)
А когда поняла, что или эко или без детей, то потихоньку, полегоньку, помолясь, читая пробирку - а и вроде ничего в этом эко страшного и нет, и даже церковь одобряет, и вообще все равно это только бог решает, а врачи лишь проводники его воли и тд) и как-то вот совсем по другому уже на эко смотрю, чем в начале планирования)) и даже не понимаю те пары, которые все планируют и планируют еб десятилетиями))
Сейчас тот же путь прохожу с дя)) сначала была стадия отрицания)) сейчас уже принятие пошло))
Буду самой счастливой многодетной мамой!)


- Konfetova
- Спелая ягодка
- Сообщения: 3145
- Зарегистрирован: 17 апр 2013, 08:54
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 2852 раза
- Поблагодарили: 2062 раза
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
У меня получилось в МиД Савеловскаяжуляжуль06 писал(а):Конфетова, подскажите, пожалуйста, где у вас с низким амг получилось?
Но эта врач сейчас оттуда ушла в Лечебный Центр на Т.Фрунзе и сказала мне, что сейчас уже, спустя почти 5 лет, когда амг ещё снизился, фсг поднялся и возраст прибавился, что она возьмёт меня только в протокол с дя, если хочу со своими пытать счастья, то это не к ней))
А с моим амг 0,16 меня с удовольствием берут в протоколы со своими в Фертимеде и ВитроКлиник)
Но, предупредили, что возможно понадобится много протоколов... очень много протоколов) очень-очень много))
Контакты все могу дать)
Буду самой счастливой многодетной мамой!)


- inviks
- Заводная старушенция
- Сообщения: 7167
- Зарегистрирован: 06 май 2014, 11:35
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 11
- Стаж бесплодия: много-много лет
- В каких клиниках проводилось лечение: Много разных
- Где было удачное ЭКО: Клиника МирА, врач Мартышкина Е.Ю.
- Сколько у вас детей: 1
- Откуда: Москва
- Благодарил (а): 2414 раз
- Поблагодарили: 6073 раза
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
А мне в Фертимеде сразу же предложили ДЯ, но это я не согласилась сначала и там пару лет билась за свои. Кстати, там как раз и получился единственный раз эмбрион отличник, но трехдневочка. Сильная у них эмбриология.
Но не вышло тогда.
Там же случилась первая донорская Б двойней с первой же попытки.
Но не вышло тогда.
Там же случилась первая донорская Б двойней с первой же попытки.
-
жуляжуль06
- Пока в пеленках
- Сообщения: 52
- Зарегистрирован: 20 фев 2017, 21:20
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Стаж бесплодия: 11
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД, Витра
- Где было удачное ЭКО: МиД
- Сколько у вас детей: 2
- Благодарил (а): 1 раз
- Поблагодарили: 14 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
В виток у меня три пролёта, но грешу только на возраст, эмбрионы по два хорошиста всегда до 5 суток доживали. Вот, думаю на мид кунцево сменить, там тоже эмбриология сильная. А дя не рассматриваю, двое детей есть, хочется такого же ребёночка. Хотя, если бы детей не было, на дя решилась бы.
-
жуляжуль06
- Пока в пеленках
- Сообщения: 52
- Зарегистрирован: 20 фев 2017, 21:20
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Стаж бесплодия: 11
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД, Витра
- Где было удачное ЭКО: МиД
- Сколько у вас детей: 2
- Благодарил (а): 1 раз
- Поблагодарили: 14 раз
- Miracles
- Спелая ягодка
- Сообщения: 4036
- Зарегистрирован: 03 июн 2018, 19:38
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 5
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД Кунцево (КДП).
4 прота со стимой, 1 ЕЦ, 1 ЕЦ срыв - ранняя овуля, 1 перенос - пролет. - Где было удачное ЭКО: Со дня на день будет
- Благодарил (а): 1787 раз
- Поблагодарили: 1756 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Процитирую одну девочку. Понравилось.
Камилла 80 15 сен 2018, 20:02
Ты даже не представляешь, какая буря эмоций настигнет, когда увидишь две полоски, а потом первые пиночки! После полосок я ещё переживала, сомневалась. А когда у меня на 8 ДПП помазало розовым цветом, я так испугалась потерять эту беременность! Потом у меня было постоянно приподнятое настроение, ощущение, что в животике подрастает малыш! Когда на скрининге мы увидели, как малыш болтает ножками, потягивается - это космос! Просто обалденные ощущения! А сейчас рано утром будит меня пиночками сладкими!![]()
Даже не приходит в голову, что это чужая яйцеклетка! Это моё!![]()
Я мужу говорю:- Если твой сын будет так рано просыпаться, я тебе его положу в кровать, а сама буду спать! А он говорит:- Ага, ты его из рук не выпустишь! Хоть подержать- то дашь?![]()
Никто из девочек ещё не сказал, что пожалели, что родили от ДЯ. Всем дети самые родные и любимые стали!
Пы.сы. Кошек и собак, своих питомцев, мы тоже не рожали, а любим, как родных!
- А чудеса случаются?
- Случаются. Но только с теми, кто в них верит.
- А с теми, кто не верит?
- А с теми, кто не верит, случаются события, не подлежащие рациональному объяснению.
Чудесный беременный домик(35-40+)
Апчхиии на тебя персонально (Зайчвадзе)
Апчхииии на тебя официально декретное!!! (Счастливый Светик)
- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Да, Мираклс, история просто замечательная...
- Konfetova
- Спелая ягодка
- Сообщения: 3145
- Зарегистрирован: 17 апр 2013, 08:54
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 3
- Сколько у вас детей: 1
- Благодарил (а): 2852 раза
- Поблагодарили: 2062 раза
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Девочки, я про каждую с этой ветки уверена, что дети будут, а то и не один;) даже про тех кто пишет что не готов на всё) ещё посмеёмся года через 3-4 над своими сомнениями)
Хорошая тут есть тема «я сюда обязательно напишу» и так круто читать, когда кто-то цитирует своё сообщение, написанное несколько лет назад и пишет «я мама»)
Хорошая тут есть тема «я сюда обязательно напишу» и так круто читать, когда кто-то цитирует своё сообщение, написанное несколько лет назад и пишет «я мама»)
Буду самой счастливой многодетной мамой!)


- Miracles
- Спелая ягодка
- Сообщения: 4036
- Зарегистрирован: 03 июн 2018, 19:38
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 5
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД Кунцево (КДП).
4 прота со стимой, 1 ЕЦ, 1 ЕЦ срыв - ранняя овуля, 1 перенос - пролет. - Где было удачное ЭКО: Со дня на день будет
- Благодарил (а): 1787 раз
- Поблагодарили: 1756 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Ой, я не могу её читать, я рыдаааааюююю
Я впечатлительнааааяяяяя
Я впечатлительнааааяяяяя
- А чудеса случаются?
- Случаются. Но только с теми, кто в них верит.
- А с теми, кто не верит?
- А с теми, кто не верит, случаются события, не подлежащие рациональному объяснению.
Чудесный беременный домик(35-40+)
Апчхиии на тебя персонально (Зайчвадзе)
Апчхииии на тебя официально декретное!!! (Счастливый Светик)
- Kontan
- Задорная первоклашка
- Сообщения: 424
- Зарегистрирован: 23 апр 2016, 00:14
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 4
- Сколько у вас детей: 3
- Благодарил (а): 26 раз
- Поблагодарили: 245 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Конфетова, присоединяюсь к мнению о детках. Отсюда точно без них не уходят.
А тем, кто имеет уже детей и не может решиться на ДЯ, могу сказать, что мой третий, который ЭКОшный, очень отличается от старших детей, хотя ЯК свои были. Так что здесь не угадаешь)
В своё время тема ЭКО была для меня чем-то из области фантастики. Потом когда встал вопрос, я стала соглашаться с тем, что мне это светит. А вот муж - ни в какую. Основной аргумент - неестественно. Затем он свыкся настолько, что даже готов был на ДЯ, также, как и я.
А тем, кто имеет уже детей и не может решиться на ДЯ, могу сказать, что мой третий, который ЭКОшный, очень отличается от старших детей, хотя ЯК свои были. Так что здесь не угадаешь)
В своё время тема ЭКО была для меня чем-то из области фантастики. Потом когда встал вопрос, я стала соглашаться с тем, что мне это светит. А вот муж - ни в какую. Основной аргумент - неестественно. Затем он свыкся настолько, что даже готов был на ДЯ, также, как и я.
- Мавика
- Впервые замужем
- Сообщения: 2332
- Зарегистрирован: 09 мар 2017, 16:43
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 8
- Стаж бесплодия: 10
- В каких клиниках проводилось лечение: Нова Клиник, Москва
- Где было удачное ЭКО: будет в Новаклиник!
- Благодарил (а): 936 раз
- Поблагодарили: 800 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Последний раз редактировалось Мавика 30 окт 2018, 16:15, всего редактировалось 1 раз.
- Miracles
- Спелая ягодка
- Сообщения: 4036
- Зарегистрирован: 03 июн 2018, 19:38
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 5
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД Кунцево (КДП).
4 прота со стимой, 1 ЕЦ, 1 ЕЦ срыв - ранняя овуля, 1 перенос - пролет. - Где было удачное ЭКО: Со дня на день будет
- Благодарил (а): 1787 раз
- Поблагодарили: 1756 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
А я не хотела.... и оттягивала, сколько могла.
Ну а потом уж понеслась, так понеслась! Полумеры не для нас! Хочу всё знать!
Ну... Я не могу иначе.
Ну а потом уж понеслась, так понеслась! Полумеры не для нас! Хочу всё знать!
Ну... Я не могу иначе.
- А чудеса случаются?
- Случаются. Но только с теми, кто в них верит.
- А с теми, кто не верит?
- А с теми, кто не верит, случаются события, не подлежащие рациональному объяснению.
Чудесный беременный домик(35-40+)
Апчхиии на тебя персонально (Зайчвадзе)
Апчхииии на тебя официально декретное!!! (Счастливый Светик)
-
Rooshka
- Задорная первоклашка
- Сообщения: 492
- Зарегистрирован: 21 фев 2017, 06:00
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 13
- Стаж бесплодия: 8
- В каких клиниках проводилось лечение: Австралия
- Благодарил (а): 432 раза
- Поблагодарили: 198 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
я на второе узи сходила утром - сегодня 7 день стимуляции (8 день цикла) - насмотрели 8 фоликов, но все равно мелкие все пока, самый большой 10мм. Опять мучительно ковыряли щупом чуть не до желудка в попытке рассмотреть, что и как...
энд опять уже отрос - 12 мм сейчас
что-то мне этот протокол совсем тяжко уже дается эмоционально, вообще сил нет ни на что уже...ну и после зимы еще, весна началась, все уже цветет и пахнет - но я что-то устала за зиму... Хочется уже планировать новый год и летние каникулы, но протокол же...
энд опять уже отрос - 12 мм сейчас
что-то мне этот протокол совсем тяжко уже дается эмоционально, вообще сил нет ни на что уже...ну и после зимы еще, весна началась, все уже цветет и пахнет - но я что-то устала за зиму... Хочется уже планировать новый год и летние каникулы, но протокол же...
- Sветик
- Трудный подросток
- Сообщения: 725
- Зарегистрирован: 27 фев 2015, 17:51
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 5
- Стаж бесплодия: 10 лет
- В каких клиниках проводилось лечение: ЭКО центр на Сурганова, Мать и Дитя, Минск, Беларусь
- Где было удачное ЭКО: Альтравита
- Сколько у вас детей: 2
- Благодарил (а): 1062 раза
- Поблагодарили: 897 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
А я как-то случайно на ЭКО попала, можно сказать. Было две естественные беременности, обе замершие на маленьком сроке. Я пошла в клинику, чтобы мне подсказали, как дальше планировать. А там меня сразу в протокол после кучи анализов...И понеслось. 4 протокола, последний без подсадки даже. И врач сказала, что больше не возьмет меня...
На тот момент я отчаилась, поехала в Москву. Предложили или со своими пробовать+ПГД, или ДЯ. На две попытки не было средств, я выбрала второе, так как в свои клетки верила мало, а в миксе отказали. Да и подзаколебалась я за 10 лет планирования и ожидания.
В глубине души у меня была малюсенькая надежда, что может быть, когда-нибудь я снова попробую со своими ЯК. Сейчас пролеты с крио отличниками от ДЯ. На УЗИ мне говорят о малом овариальном резерве, овуляция стала раняя, эндометриоз, аденомиоз... У меня надежды и на ЕБ нет, фолликулы сами не лопаются. А так хочется вторую детку.
На тот момент я отчаилась, поехала в Москву. Предложили или со своими пробовать+ПГД, или ДЯ. На две попытки не было средств, я выбрала второе, так как в свои клетки верила мало, а в миксе отказали. Да и подзаколебалась я за 10 лет планирования и ожидания.
В глубине души у меня была малюсенькая надежда, что может быть, когда-нибудь я снова попробую со своими ЯК. Сейчас пролеты с крио отличниками от ДЯ. На УЗИ мне говорят о малом овариальном резерве, овуляция стала раняя, эндометриоз, аденомиоз... У меня надежды и на ЕБ нет, фолликулы сами не лопаются. А так хочется вторую детку.
01.02.2020 - перенос 3ВВ
10 дпп - 219
14 дпп - 2335
19 дпп - 16021
21 дпп - ПЯ
26 дпп - СБ+
10 дпп - 219
14 дпп - 2335
19 дпп - 16021
21 дпп - ПЯ
26 дпп - СБ+
-
Rooshka
- Задорная первоклашка
- Сообщения: 492
- Зарегистрирован: 21 фев 2017, 06:00
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 13
- Стаж бесплодия: 8
- В каких клиниках проводилось лечение: Австралия
- Благодарил (а): 432 раза
- Поблагодарили: 198 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
У нас никаких вариантов нет кроме как со своими заканчивать этот забег - наша клиника не делает с донорскими никакими, посольку государственная, а в дргугую мы уже не успеем со всеми пересдачами всех анализов и прочим - совсем будем старенькими))
Ну и муж мой никаких вариантов не принимает кроме генетически своих и моих...А я чета так уже устала от всего этого, что мне чем дальше, тем больше все равно становится...Надеюсь что это временный упадок, потому что вообще не свойственно для меня такое унылое состояние - но подозреваю, что светит мне долгое знакомство со шринком после всей этой эпопеи...сегодня посчитала точно по своим записям - это у меня 10 стимуляция сейчас, всего уже 13 подсадок за спиной.
Ну и муж мой никаких вариантов не принимает кроме генетически своих и моих...А я чета так уже устала от всего этого, что мне чем дальше, тем больше все равно становится...Надеюсь что это временный упадок, потому что вообще не свойственно для меня такое унылое состояние - но подозреваю, что светит мне долгое знакомство со шринком после всей этой эпопеи...сегодня посчитала точно по своим записям - это у меня 10 стимуляция сейчас, всего уже 13 подсадок за спиной.
- Miracles
- Спелая ягодка
- Сообщения: 4036
- Зарегистрирован: 03 июн 2018, 19:38
- Пол: Женский
- Сколько попыток ЭКО: 5
- В каких клиниках проводилось лечение: МиД Кунцево (КДП).
4 прота со стимой, 1 ЕЦ, 1 ЕЦ срыв - ранняя овуля, 1 перенос - пролет. - Где было удачное ЭКО: Со дня на день будет
- Благодарил (а): 1787 раз
- Поблагодарили: 1756 раз
Re: Тему бодро продолжаем, темпа не снижаем, после 40-ка рожаем:)
Рушка!
Мы в тебя верим!
В этот раз ты беременеешь...беременеешь....беременеешь....
Феяк- феяк!

Мы в тебя верим!
В этот раз ты беременеешь...беременеешь....беременеешь....
Феяк- феяк!
- А чудеса случаются?
- Случаются. Но только с теми, кто в них верит.
- А с теми, кто не верит?
- А с теми, кто не верит, случаются события, не подлежащие рациональному объяснению.
Чудесный беременный домик(35-40+)
Апчхиии на тебя персонально (Зайчвадзе)
Апчхииии на тебя официально декретное!!! (Счастливый Светик)
- Удалить cookies конференции
- •
- Часовой пояс: UTC+03:00
