Пробирка

Выдержки из статьи Петрова Г. Н. 1955 г.

• Экскурс в историю

"...Большая часть исследований, посвящённых процессу оплодотворения у млекопитающих, проводилась в основном на крысах и мышах, являющихся лабораторными животными. Этот процесс был хорошо изучен у кроликов. Кроме того, в последних работах были освещены вопросы оплодотворения сельскохозяйственных животных – свиней. Коров, овец.
Что касается оплодотворения яйцеклетки человека,  то информации об этом немного. Минкин и Рокк осуществили в 1944 году около 800 опытов, однако по большей части все эти попытки были неудачными. Лишь 3 раза удалось добиться дробления человеческой яйцеклетки вне организма. Стадия двух бластомеров была достигнута спустя 10 часов после осеменения.

Гамильтон тогда же предоставил результаты своих опытов по оплодотворению яйцеклетки человека in vitro. На микрофотографиях, показанных им, продемонстрирован срез яйцеклетки, на котором заметно, как направительное тельце отделяется, а затем располагается в перивителлиновом пространстве.

В 1953-м году оплодотворение ооцита человека вне организма тщательно изучил Шеттлз. Все исследования он осуществлял прижизненно, применив фазово-контрастный микроскоп. Яйцеклетки для наблюдений были взяты у женщин, которым делали операцию. Как отмечается в записях Шеттлза, на то, чтобы проникнуть внутрь ооцита, сперматозоидам необходимо около 18 минут. Через 10-20 часов от начала культивирования направительные тельца отделяются. Процесс оплодотворения яйцеклетки, взятой из фолликула, ничем не отличается от аналогичного процесса, происходящего с яйцеклеткой, вымытой из труб. Автору не удалось понаблюдать непосредственно за процессом оплодотворения яйцеклетки и её последующим дроблением. Он смог увидеть лишь, как рассеивается лучистый венец, затем сперматозоид проникает внутрь, и образуются направительные тельца.

Спустя 2 года Шеттлзом была опубликована информация о том, как происходит культивирование человеческих ооцитов в особых чашках. Ему удалось по ходу одного из опытов получить через трое суток после начала инкубации стадию морулы (32 клетки). При этом бластомеры имели разную величину, фазы деления также были неодинаковыми.

Таким образом, к 1955 году существуют отрывочные сведения о том, как последовательно происходит дробление человеческой яйцеклетки. Первые результаты исследований, посвящённых дроблению яйцеклеток человека и животных,  были опубликованы в 1955-56 г.г. На данный момент у нас есть информация, благодаря которой можно проанализировать оплодотворения ооцита человека и млекопитающих вне организма с аналогичным процессом, но протекающим в трубах (автор – Б.П. Хватов).
Первые результаты были получены нами на основе исследований, полученных при наблюдении за оплодотворением и дроблением  яйцеклеток кроликов, овец и свиней. Прокалывая зрелый фолликул, мы доставали ооцит, помещая его затем на специальные предметные стекла, оснащённые луночкой. Далее стёкла вместе с ним погружали в разные питательные среды, осуществляя все операции при полной стерильности, в утеплённой камере, на нагревательном столике микроскопа.

Получив результаты наблюдений за процессом оплодотворения яйцеклетки у млекопитающих, мы приступили к изучению оплодотворения человеческих ооцитов. Их мы получали из яичников, которые удалялись по ходу оперативного вмешательства. Помещая яйцеклетки в специальные бюксы, в которых находилась питательная среда (5 мм раствора Рингера, 0,5 мл фолликулярной жидкости, капля семенной жидкости), поддерживая температуру 38,5 градусов, нам удалось добиться лучших результатов оплодотворения яйцеклетки и её последующего дробления.

После оплодотворения ооцита в разные периоды помещались последовательно в жидкость Карнуа, затем  раствор формалина и фиксатор Навашина-Крылова. Окрасив ооциты кармином, мы заливали их в парафин, а затем разлагали на 8-10 серийных срезов, каждый из которых имел толщину 10-20 U. Каждый срез дополнительно окрашивался железным гематоксилином или кармином, после чего мы ставили реакцию Фёльгена.

Спустя 2 часа после осеменения, сперматозоиды проникали внутрь оболочки яйцеклетки. Мы наблюдали, как в кортикальную часть цитоплазмы ооцита попадали сразу несколько сперматозоидов. Их можно было обнаружить среди разрыхленных клеток фолликулов. Нам удалось установить, что ядро яйцеклетки располагается у анимального полюса.

Спустя 4 часа после осеменения, в яйцеклетку попадает уже множество сперматозоидов. Некоторые из них находятся в цитоплазме клетки, другие - в перивителлиновом пространстве. Часть спермиев расположена так, что можно увидеть только их набухшую головку, у прочих заметны и головка, и хвост. Ядро яйцеклетки находится в центре, протоплазма имеет крупнозернистую консистенцию.

Спустя 15 часов после осеменения, сделав 2 среза одной и той же яйцеклетки, мы обнаружили процесс слияния женского и мужского пронуклеусов. Исследовав перивителлиновое пространство, мы обнаружили направительные тельца.

Спустя 18 часов после того, как было произведено осеменение, можно увидеть момент оплодотворения яйцеклетки. Ядра сперматозоида и яйцеклетки находятся рядом, при этом ооцит сохраняет свою оболочку неповреждённой. Заметно, что клетки лучистого венца являются рассеянными. На фотографиях можно увидеть, что ядра яйцеклетки человека после оплодотворения не сохраняют прежнюю форму, скорее всего, это зависит от того, как распределяется хроматин.

Через 20 часов после того, как было произведено осеменение, на срезе человеческой яйцеклетки заметно, как появляется первая борозда, означающая дробление. При этом увеличивается перивителлиновое пространство, истончается оболочка яйцеклетки. В перивителлиновом пространстве можно увидеть набухшие сперматозоиды.

Через 26 часов после того, как было произведено осеменение, яйцеклетка достигает стадии дробления. Можно увидеть 3 бластомера, размеры которых неодинаковы. Один бластомер достиг стадии митоза, второй уже разделился. Оболочка яйцеклетки очень сильно истощена.

Сравнивая процесс оплодотворения ооцита человека и животных, мы заметили, что первые стадии этого процесса практически не имеют различий. Оплодотворение человеческой яйцеклетки сопровождается более явными изменениями структуры и размера ядра. При дроблении человеческой яйцеклетки прозрачная оболочка существенно истончается. При этом первая борозда дробления у нее возникает с анимального полюса, так же, как  у животных. Этот процесс начинается спустя 18 часов после того, как в среду, в которую помещен ооцит, добавляют семенную жидкость..."